Ботулизм сельскохозяйственных животных (Botulismus)

Ботулизм сельскохозяйственных животных - кормовое отравление, характеризующееся параличами двигательной системы, в первую очередь и чаще всего параличами жевательного и глотательного аппарата.

Симптомокомплекс болезни обусловлен отравленцем токсином, который образует при соответствующих условиях в кормах и продуктах возбудитель ботулизма - b. botulinus.

Ботулизм, являясь относительно редким заболеванием как среди людей, так и животных, заслуживает, однако, серьёзного внимания потому, что может давать большие вспышки с очень высоким процентом смертности (до 90 - 100%). Необходимо также подчеркнуть, что и за границей, и в СССР ботулизм вызывался у лошадей чаще всего употреблением недоброкачественных силосованных кормов (Муромцев, Дукалов).

Не преувеличивая опасности ботулизма, следует, однако, всегда учитывать возможность появления этого заболевания в результате нарушения правил по заготовке и хранению кормов, особенно силосованных.

Исторический обзор и распространённость. Термином "ботулизм" вначале определяли только отравления людей, наблюдавшиеся после употребления испорченных мясных продуктов. Позднее удалось доказать, что отравление обусловливается токсином анаэробно растущего микроба, который был назван b. botulinus (botulus - колбаса).

Среди сельскохозяйственных животных и птиц ботулизм диагносцирован лет 30 - 35 назад.

В СССР интерес к ботулизму возник в связи с выяснением этиологии инфекционного энцефаломиелита лошадей. В клинической картине этих заболеваний действительно имеется ряд сходных признаков.

Случаи ботулизма среди других видов сельскохозяйственных животных, кроме лошадей, в СССР не зарегистрированы.

Этиология. Возбудитель ботулизма - спорообразующий, анаэробно растущий микроб. Термин "b. botulinus" объединяет группу микробов, весьма сходных по морфологическим и культуральным свойствам, а главное - по действию их токсинов на животный организм. В группе b. botulinus различают в настоящее время пять типов - A, B, C, D и E. Каждый из них вырабатывает свой специфический токсин, который нейтрализуется сывороткой, полученной гипериммунизацией токсином только этого типа.

При биологической профилактике и серотерапии ботулизма (см. ниже) необходимо всегда иметь в виду существование различных типов ботулинуса. Неодинакова и восприимчивость разных видов животных к токсинам отдельных типов; однако клиническая картина, вызываемая у всех видов животных токсинами всех типов, сходна. Некоторые различия между отдельными типами ботулинуса имеются и в морфологических, культуральных, биохимических, а главное - в серологических свойствах их.

Морфологические свойства. B. botulinus - крупная палочка с закруглёнными концами, 3 - 9 μ длины, 0,3 - 0,8 μ ширины. Палочки обычно располагаются изолированно, иногда парами, реже в виде коротких цепочек; в старых культурах находят удлинённые формы, нити. В молодых культурах палочки грамположительны; типы A и B подвижны, а типы C, D и E слабо или совсем неподвижны. В организме павших животных b. botulinus микроскопически не обнаруживается, так как заболевание обусловлено не септицемией, а отравлением токсином. Редко удаётся и получение культур путём высевов.

Спорообразование наблюдается через 24 - 48 часов роста в термостате на среде Тароцци. Форма спор овальная, расположение - чаще субтерминальное, причём у протеолитических штаммов (A, B) спора толще палочки, почему палочки со спорами напоминают теннисную ракетку. Споры типов C, D и E - овальные, конечные, обычно не превышают ширины палочки.

Культивирование. B. botulinus относительно нетребователен к питательным субствратам: хорошо растет как на мясных, так и на растительных бактериологических средах. Обычной средой для выращивания служит печёночный бульон с кусочками печени (среда Тароцци). Вместо печени можно брать кусочки мяса, яичного белка, моркови, картофеля, гороха. Оптимум для роста 25 - 37°С, оптимум pH =6,8 - 7,6.

Рост ботулинуса проявляется помутнением среды, газообразованием и резким запахом прогорклого масла, особенно у протеолитических штаммов. На 5 - 7-е сутки кусочки печени (мяса) в среде становятся грязно-серыми; ясно заметно переваривание печени (мяса). Сахаролитические штаммы не переваривают белка, и кусочки печени остаются в среде неизменёнными. Протеолитические штаммы разжижают желатину и в мозговой среде дают почернение кашицы. Типы A и B свёртывают казеин молока и через 6 - 14 дней роста полностью его переваривают. B. botulinus не образуют в средах индола. Газообразование связано с выделением водорода (главным образом), углекислоты и в небольших количествах сероводорода и азота. В культурах образуются кислоты: масляная, изовалериановая, уксусная, молочная.

Рост на твёрдых средах возможен только в строго анаэробных условиях. На кровяном агаре колонии круглые или неправильной формы, влажные, слегка возвышенные, окружённые зоной гемолиза. В глубоком сахарном агаре типичны колонии в виде комочков ваты с более плотным центром и расходящимися в стороны пушинками.

Штаммы типов A и B разлагают глюкозу, мальтозу, сахарозу, лактозу, декстрин, крахмал, салицин с образованием кислоты и газа; тип C - глюкозу, мальтозу, глицерин, инозит, левулёзу, но не ферментирует сахарозы, лактозы, маннита, салицина.

Рис. 20. Бациллы ботулинуса на среде Тароцци (3-суточная культура): характерные формы ракеток

Токсинообразование. Токсин ботулинуса - самый сильный из всех известных ядовитых микробных субстанций. Он образуется во всех растительных и мясных продуктах при соответствующей температуре, влажности и нейтральной или слабощелочной реакции.

Оптимум температуры для токсинообразования 25 - 38°С; при температуре ниже +8°С токсинообразование практически не имеет места. На мясных средах максимум токсинообразования наступает на 5 - 9-е сутки.

Токсин ботулинуса, в отличие от большинства бактериальных токсинов, не ослабляется от действия кислоты и ферментов желудочного сока. При кислой реакции, в пределах pH=3 - 6, токсин не только не ослабляется, а, наоборот, стабилизируется. В резко щелочной среде (при pH выше 8,5) он быстро разрушается. Консервирование продуктов (соление, копчение, вяление, замораживание) заметно не ослабляет токсина.

В сравнении с другими бактериальными токсинами ботулиновый более устойчив и к высокой температуре. Так, нагревание продуктов, содержащих токсин, в течение 10 - 15 минут при 100°С не всегда надёжно обезвреживает их. В жидких питательных средах (бульон) ботулиновый токсин при нагревании до 80 - 100°С разрушается уже через несколько минут.

Описаны нетоксигенные штаммы ботулинуса; их эпидемиологическое значение точно пока не выяснено.

Устойчивость спор. Споры b. botulinus отличаются исключительной стойкостью; они выдерживают кипячение при 100°С в течение 6 часов; надёжно убивает их лишь 10-минутное нагревание при 120°С. Ещё устойчивее споры этого микроба к низким температурам: выдерживание споровой культуры при - 18°С свыше года не оказывает никакого влияния на жизнеспособность спор. Практически важно влияние кислот и поваренной соли на прорастание спор ботулинуса. Подкисление продуктов и кормовых средств до pH=3,0 - 4,0 надёжно задерживает развитие ботулинуса; такое же действие оказывает концентрация выше 10% поваренной соли. 10% соляная кислота нацело разрушает споры ботулинуса при комнатной температуре через 1 час; формалин же, разбавленный пополам с водой, только через 24 часа.

Распространённость. В, природе b. botulinus широко распространён. Он обнаруживается как в девственных, так и в культурных почвах. Процент нахождения ботулинуса в почвах разных стран колеблется в очень широких пределах. Чаще всего возбудитель ботулизма обнаруживается в растительных и кормовых средствах, особенно на пятнах здоровых с виду фруктов, а также в растительных продуктах, загрязнённых частичками земли и заражённых плесенями и гнилостными бактериями. В Америке в горохе ботулинус был найден в 32% образцов, в перебродившем зелёном корме - в 20% образцов, в различных фруктах - в 30% (исследовано около 6 000 образцов).

Этими данными особенно убедительно подчёркивается необходимость самой тщательной отбраковки всех растительных продуктов, поступающих в корм и продажу, особенно для изготовления консервов и силосованных кормов. Совершенно свежие, здоровые, не загрязнённые землёй овощи, фрукты, зелень практически в отношении ботулизма совершенно безопасны. Только такого качества продукты и должны применяться как для консервирования, так и для силосования.

Восприимчивость различные видов животных. К экспериментальному заражению токсином ботулинуса, а также к заболеванию в естественных условиях восприимчивы все теплокровные животные и птицы. Холоднокровные - рыбы и лягушки - отличаются исключительной резистентностью к токсину ботулинуса. Из теплокровных наименее чувствительны к токсину ботулинуса свиньи.

Значительной резистентностью обладают дикие грызуны (кроты, крысы), собаки и хищные звери.

Чувствительность животных неодинакова и в зависимости от типа токсина. Так, лошадь исключительно чувствительна к токсину типа B и E, несколько менее - к токсину типа A и ещё менее - к токсину типа C. Крупный рогатый скот, наоборот, к токсинам типа A и B значительно устойчив; отравления среди крупного рогатого скота обусловлены чаще всего токсином типа C; заболевания у рогатого скота обычно вызываются типами C и D. Птицы (куры, утки) к токсинам типов A и B также мало чувствительны; .заболевания кур обычно обязаны типу C. Из мелких экспериментальных животных наиболее восприимчивы к токсинам всех типов белые мыши и морские свинки, значительно менее - кролики, кошки. Ядовитость фильтратов культур ботулинуса для белых мышей может доходить до 1×10^-6мл; концентрированный же токсин убивает мышей при подкожном введении в дозах 1×10^-8 г.

Источники инфекции и пути естественного заражения. В естественных условиях ботулизм чаще всего наблюдается среди лошадей, кур, реже - среди крупного и мелкого рогатого скота. Единичные заболевания описаны у свиней. Заболевания крупного рогатого окота и овец зарегистрированы только в Австралии, Африке и Калифорнии. Лишь в последние годы сходные заболевания описаны в Швеции, Голландии и других европейских странах.

Своеобразен источник этого заболевания у крупного рогатого скота в Южной Африке. Появление ботулизма у рогатого скота там стояло в связи с так называемым фосфорным голодом, когда крупный рогатый скот начинал поедать на пастбище кости павших животных; если эти кости содержали токсин ботулинуса, возникало отравление. Источником отравления в таких случаях были трупы грызунов: кротов, крыс, мышей, кошек и различных хищников. Эти животные часто бывают бациллоносителями ботулизма. После смерти животного возбудитель размножается в трупе, образует токсин, который и служит причиной отравления. На этом основании некоторые авторы даже утверждают, что ботулизм имеет место только в тех случаях, когда в корме имеются разложившиеся трупы, инфицированные ботулинусом. Этим авторам удалось выделить культуры ботулинуса из трупа крысы, найденной в стойле, в котором заболели ботулинусом мулы. Трупами крыс был загрязнён корм. Часть трупа крысы авторы растёрли в кашицу и этим материалом вызвали типичный ботулизм у лошадей. Культуры ботулинуса были выделены из трупов крыс и оказались высокотоксичными; фильтратами этих культур у мелких экспериментальных животных была также вызвана типичная картина ботулизма.

Это обстоятельство следует особенно учитывать при хранении кормов, а главное - при заготовке силосованных кормов. Материал, используемый для силосования, должен быть тщательно проверен на отсутствие в нём трупов грызунов и их остатков.

Следует заметить, что часто корм, вызывавший отравления лошадей, оказывался безвредным для крупного рогатого скота.

Большие вспышки ботулизма среди птиц (кур, индеек, уток, голубей) неоднократно описывались в литературе, главным образом, в английской и американской. Источником заражения служили обычно испорченные овощи, фрукты и фураж, содержавшие токсин ботулинуса. Часто заболевание кур вызывалось продуктами, послужившими причиной отравления людей. Доказано, что у кур ботулизм нередко возникает в результате поедания личинок Lucilia caesar, вылупившихся из яиц в трупе животного, павшего от ботулизма.

Источником ботулизма лошадей чаще всего бывает недоброкачественный силосованный корм (маисовый, овсяный силос), испорченный овёс и даже сено. Отравление лошадей было однажды вызвано водой, в которой размачивалась испорченная овсяная солома, загрязнённая куриным помётом. Как мы уже упоминали, птицы, в частности, куры, мало чувствительны к токсинам типов A и B, но могут быть носителями возбудителя. Загрязнение кормовых средств птичьим помётом может, поэтому, всегда представлять опасность в отношении ботулизма.

В эпизоотологическом отношении не меньшее значение, чем приведённые наблюдения, имеет также и следующий факт. Исследованием было установлено, что источником ботулинуса в консервах послужили чрезвычайно мелкие крупинки земли, приставшие к неотмытым горошинам. Ботулинус - почвенный микроб; поэтому одним из основных предохранительных мероприятий в отношении ботулизма как людей, так и животных является тщательная очистка от земли как пищевых продуктов, так и кормов.

Здесь же следует ещё раз подчеркнуть, что ни разу не было описано отравлений людей и животных после поедания свежих, неиспорченных растительных продуктов. Наоборот, затхлые, подгнившие концентрированные корма, подвергавшиеся самонагреванию, подмоченные (залежавшаяся, запаренная мякина и др.), как установлено, неоднократно служили источником ботулизма. В свежем растительном продукте не происходит размножения ботулинуса, а следовательно, и токсинообразования; в загнивших же продуктах симбиоз с плесенями и гнилостными микробами способствует как размножению, так и токсинообразованию ботулинуса.

Заслуживает внимания и другой факт, давно отмеченный как эпидемиологами, так и эпизоотологами. Обычно во всех продуктах растительного и животного происхождения токсин ботулинуса распределён не равномерно, а лишь в отдельных участках. Заражённые участки, как и весь остальной корм, часто ничем не отличаются по внешнему виду, запаху и консистенции от незаражённого корма. Эти данные следует учитывать при исследовании кормов на наличие токсина ботулинуса. Отсюда становится понятным, почему заболевают далеко не все животные, поедавшие заражённый корм.

Несомненно, существуют ещё и другие способы естественного заражения. Однако к настоящему времени уже накоплено достаточно эпизоотологических данных, чтобы на основании их строить надёжные профилактические, ветеринарно-санитарные мероприятия как в отношении ботулизма животных, так и людей.

Патогенез. Практически ботулизм следует рассматривать как отравление продуктом, содержащим готовый токсин возбудителя. Правда, неоднократно удавалось заражать мелких экспериментальных животных скармливанием отмытых спор ботулинуса. Однако для этого необходимо такое огромное количество материала, какое вряд ли может быть принято с пищей в естественных условиях. С другой стороны, заражаемым животным предварительно обычно давались препараты опия, белладонны или жёлчи. Конечно, условия этих опытов слишком далеки от естественней обстановки, и на основании их трудно говорить об инфекционном характере ботулизма. Этому противоречит и относительная редкость заболевания, несмотря на широкую обсеменённость продуктов и кормов ботулинусом.

Сторонники токсико-инфекционной природы ботулизма обосновывают свои утверждения затяжными случаями, когда заболевание обнаруживается на 14-й и даже на 20-й день после принятия в пищу заражённого продукта. В зависимости от индивидуальной чувствительности, от количества токсина в принятом продукте, проявление симптомов заболевания может, конечно, задержаться. Однако нельзя исключить того, что небольшие количества токсина, принятые в пище с продуктом, могут вызвать атонию кишечника и тем облегчить размножение в желудочно-кишечном тракте возбудителя и образование им токсина. В громадном большинстве случаев ботулизм протекает в виде острого и подострого отравления, связанного с наличием в продукте уже готового токсина в смертельных дозах.

Принятый с продуктом токсин может всасываться слизистой всего желудочно-кишечного тракта, даже в ротовой полости. Описаны отравления людей, когда продукт был испробован только на вкус и даже не проглатывался.

О механизме действия токсина нет единого мнения. Одни исследователи считают, что непосредственно на нервную ткань токсин не действует. Он вызывает нарушения в сосудистой системе, что приводит к кровоизлияниям в мозговых оболочках, головном и спинном мозге. Токсин, возможно, действует на центральную нервную систему, в частности, на продолговатый мозг.

Клиническая картина. Основной симптом ботулизма у всех видов животных - параличи двигательной системы. Особенно характерен так называемый синдром бульбарного паралича: паралич жевательного и глотательного аппарата.

Обычно как при экспериментальном заражении, так и в естественных условиях заболевание начинается после некоторого инкубационного периода - от нескольких часов до нескольких дней. У всех видов животных различают четыре формы болезни: молниеносную, острую, подострую и хроническую. Течение ботулизма обусловлено, главным образом, количеством принятого с кормом токсина: чем больше токсина имелось в корме, тем обычно короче инкубационный период, тем острее заболевание.

Для ботулизма характерно отсутствие повышенной температуры; нередко наблюдается даже субнормальная температура. Никаких изменений не устанавливают и в картине крови.

Выздоровление крайне редко, особенно при острых формах.

Лошади.Молниеносная форма. Смерть наступает обычно в течение нескольких часов. Иногда животное, ранее совершенно здоровое, находят утром мёртвым, распростёртым на боку. В таком положении лошадь может находиться, будучи ещё в коматозном состоянии, незадолго ДСУ смерти; иногда животное делает попытки встать, поднимает голову, но скоро обратно валится на бок. Синдром бульбарного паралича при этой форме болезни бывает выражен редко. Для диагностики случаи молниеносной формы представляют большую трудность.

Острая форма чаще всего наблюдается при вспышках ботулизма. Обычно в хозяйстве заболевает несколько лошадей. Острое отравление может протекать, как и описанная молниеносная форма, с той лишь разницей, что болезнь затягивается до 1% - 2 суток. И в этом случае в первую очередь резко выражено расслабление скелетной мускулатуры. Лошадь может встать лишь с большим трудом и скоро снова ложится на бок. Лёжа, животное ещё в состоянии поднимать голову и шею и реагировать глазами и ушами на приближение человека.

Наиболее выраженный симптом - паралич языка. Язык торчит изо рта между зубами, либо висит совершенно свободно, при опущенной нижней парализованной челюсти. При более лёгких формах лошадь ещё может убирать язык, но обычно он вываливается обратно. В тяжёлых случаях язык набухает, становится сине-серым, выпадает, легко подвергается ранениям, изъязвляется и издаёт неприятный запах.

Принятие корма и воды затруднено или невозможно: лошадь может захватывать с трудом, лишь небольшими порциями, сено, подолгу держит его во рту, стараясь пережевать или, устав жевать, оставляет корм между зубами; иногда пережёванный комок, смоченный слюной, выпадает изо рта. Лошадь с параличом глотки проявляет. временами большую жажду, охотно опускает морду в воду, но не может её проглотить, и вода выливается обратно через рот и нос. Отдельные авторы отмечают у больных лошадей зевоту и потение. У некоторых животных бывает более или менее выраженное слюнотечение, но оно может и совершенно отсутствовать. Истечение из носа наблюдается почти в каждом случае, так как слизь, вследствие паралича зева и языка, выделяется через ноздри. Деятельность кишечника может быть и не нарушена; испражнения нормальны даже у лежащих животных. Однако чаще бывает запор, и фецес выделяются в незначительных количествах, либо совсем задерживаются. Иногда наблюдаются колики. Выделение мочи чаще нормально.

Пульс учащён, кровяное давление понижено. Дыхательная деятельность большей частью возбуждена, что объясняется тщетными попытками встать.

Чувствительность в начале заболевания и при дальнейшем развитии его в большинстве случаев резко не изменяется; сохраняется и сознание. Лошадь, если она даже лежит, узнаёт хозяина, двигает ушами и глазами.

Рефлексы - корнеальный, пальпебральный, ушной, пателлярный, хвостовой, заднего прохода - обычно сохранены. В начале болезни налицо и кожный рефлекс: на укол иглой лошадь часто отвечает резким движением. В тяжёлом состоянии кожная чувствительность понижена.

Температура, как уже упоминалось, остаётся нормальной и только незадолго перед смертью может понизиться.

Подострая форма. Сюда относятся случаи ботулизма длительностью от 2 до 7 дней. Симптомы - те же, что и при острой форме, но обычно более резко выражен паралич глотки и языка.

Хроническую форму диагносцировать чрезвычайно трудно. Лишь при вспышках ботулизма, когда заболевают несколько лошадей, причём у некоторых болезнь протекает хронически, удаётся поставить правильный диагноз. Хроническая форма ботулизма нередко затягивается на декады. При этой форме вначале может наблюдаться паралич языка и глотки, но вскоре он исчезает. Основной признак - затруднённость движений: походка неуверенная, иногда качающаяся; лошадь беспорядочно поднимает ноги, спотыкается на маленьких препятствиях, оступается, с трудом встаёт и долгое время стоит. Аппетит не теряется.

Крупный рогатый скот. Инкубационный период длится 4 - 6 дней. Молниеносная форма ботулизма наблюдается у крупного рогатого скота крайне редко; чаще болезнь затягивается на 3 - 6 дней.

Начальные проявления ботулизма - уменьшение аппетита, затруднение глотания. Корм прожёвывается медленно, с трудом проглатывается, задерживается у основания языка и даже выпадает изо рта. Первые дни животное ещё в состоянии принимать воду. Изо рта вытекает густая, вязкая слюна. Температура, как и при ботулизме других видов животных, не повышена (обычно не выше 38°С). Походка становится неуверенной; задние ноги двигаются с трудом; животные часто ложатся. Быстро наступает резко бросающееся в глаза исхудание. Перистальтика кишечника прекращается; развивается сильный запор; экскременты твёрдые, со слизью жёлтого цвета. Дыхание абдоминального типа, короткое; сердцебиения обычно замедлены; пульс слабый. Лактация сразу же резко сокращается. Отделение мочи также уменьшается. Глаза теряют обычный блеск, становятся сухими; радужная оболочка вяло или совсем не реагирует на свет. Кожная чувствительность сохраняется. Мышцы бёдер, шеи, живота дряблы. Стельные коровы не абортируют.

При исследовании крови, как и у других видов животных, заметные отклонения от нормы обнаруживаются не всегда; сахар, белок и жёлчные пигменты в моче отсутствуют.

При подострой и хронической форме (свыше 5 суток) нередко бывают поражения лёгких. У крупного рогатого скота чаще, чем у других видов животных, наблюдаются случаи спонтанного выздоровления.

Ботулизм овец и коз, описанный в Южной Африке и Австралии, протекает обычно в молниеносной или острой форме. Клиническая диагностика ботулизма у мелкого рогатого скота поэтому чрезвычайно затруднена.

Ботулизм птиц (кур, уток и др.) неоднократно описан в виде больших вспышек в США. Отравления у кур чаще всего связаны с поеданием частей трупов павших животных, испорченных мясных и растительных продуктов, особенно отбросов консервов.

Продолжительность болезни - от 10 - 12 часов до 3 - 4 дней. Наиболее характерный признак - парез мышц шеи (отсюда встречающийся в литературе термин "мягкая шея"). Куры унылы, отказываются от корма, как бы упираются клювом в землю; голова падает, когда её поднимают; птица лежит неподвижно.

Патолого-анатомические изменения. При вскрытии животных, павших от ботулизма, характерных изменений не обнаруживают. В ротовой полости часто находят остатки корма, набухание, отёчность и даже изъязвление языка. Все внутренние органы полнокровны, мягкой консистенции. В ткани мозга, лёгких, почек, на слизистой тонких кишок могут встречаться точечные кровоизлияния, а в печени, при длительном течении, кроме того, желтоватые участки, как на поверхности, так и на разрезе. Скелетные мышцы часто сероватого цвета, мягки, легко рвутся.

Рис. 21. Ботулизм: паралич; голова упирается клювом в землю

Диагноз. Клиническая диагностика выраженных форм ботулизма у всех видов животных не представляет большого затруднения. Нормальная или субнормальная температура, паралич глотательного аппарата и двигательных мышц, сохранение рефлексов и сознания - все эти признаки, особенно когда они наблюдаются у нескольких животных одновременно, настолько характерны, что врачу, знакомому с их описанием, нетрудно разобраться в характере заболевания и исключить отравления ядовитыми травами или химическими веществами.

Всё же для окончательной диагностики ботулизма обязательны лабораторные исследования.

Лабораторный диагноз ботулизма сводится к обнаружению токсина и возбудителя: а) в подозреваемых кормовых продуктах и б) в организме павших животных.

Обнаружение токсина ботулинуса в кормовых средствах. Пробы подозрительного корма, в первую очередь из его участков с изменённым внешним видом и запахом, скармливают мелким опытным животным (морским свинкам). Если они отказываются от такого корма, пробы растирают в стерильной ступке с физиологическим раствором или стерильной водой (из расчёта приблизительно 1:2 по весу). Эмульсию оставляют стоять при комнатной температуре на 1 - 2 часа для экстрагирования токсина, центрифугируют или фильтруют через бумажный фильтр до прозрачности. 1 - 2 мл полученной жидкости спаивают двум морским свинкам через шприц без иглы или через канюли. Смерть этих животных, при характерной картине ботулизма (параличи, особенно мышц брюшной стенки и задних конечностей), обычно наступает в течение первых трёх суток и только в очень редких случаях может последовать через 8 - 10 дней.

Необходимо знать, что далеко не всегда ядовитый корм изменён по цвету и вкусу, а главное, далеко не всегда токсин равномерно распределён в кормовом продукте, особенно сухой консистенции; поэтому при отрицательном результате нельзя ограничиваться испытанием только одной порции.

Как правило, одновременно выпаивают морским свинкам и гретый настой корма (при 100°С 10 - 15 минут). При этой температуре токсин разрушается в настое, и морские свинки, накормленные гретой вытяжкой, должны остаться в живых. Такое испытание даёт право исключить наличие в корме ядовитых химических веществ.

При отсутствии морских свинок токсикологическую пробу можно поставить на мышах заражением вытяжкой в дозе 0,5 - 1 мл под кожу спины. Поскольку при таком заражении мыши часто гибнут от посторонней инфекции, необходимо обязательно соблюдать следующие правила: а) брать настой, отцентрифугированный или отфильтрованный до полной прозрачности; б) применять и гретый и негретый настой (каждый на двух мышах); в) при падеже мышей от негретого настоя поставить для окончательного дцагноза пробу со специфическими сыворотками.

Эту пробу осуществляют следующим образом. 0,5 мл прозрачной указанной выше вытяжки смешивают с 0,2 мл антиботулиновой сыворотки; смесь, после контакта при комнатной температуре в течение 1 часа, вводят под кожу белой мыши. Второй паре мышей инъицируют ту же вытяжку, но в смеси с нормальной лошадиной сывороткой. Падёж первой пары мышей и выживание второй пары даёт право сделать заключение о наличии в продукте специфического токсина ботулинуса. Для такого опыта пригодны морские свинки. Срок наблюдения за мышами - до 8 дней, за морскими свинками - до 10 дней.

Само собой понятно, что во всех случаях следует вскрывать павших экспериментальных животных для исключения посторонней инфекции.

Указанные испытания исключают необходимость для работников, знакомых с ботулизмом, ставить опыты на других, ранее применявшихся, животных (на кошках, а тем более на крупных животных).

Обнаружение токсина ботулинуса в организме животных.

а) В содержимом желудочно-кишечного тракта. Вытяжку готовят так же, как указано для кормовых средств. Для исследования в первую очередь берут содержимое желудка и толстых кишок. Исследование проводят на морских свинках или белых мышах по описанной выше методике.

в) В органах. Токсин можно часто обнаружить в селезёнке, печени, головном и спинном мозге, сыворотке крови. Кусочки тканей, стерильно взятые, растирают в ступке с физиологическим раствором или стерильной водой до консистенции густой кашицы. Отцентрифугированную или до прозрачности отфильтрованную вытяжку (после контакта с органами в течение одного часа) испытывают на белых мышах подкожным заражением в чистом виде, в смеси с антиботулиновой и нормальной лошадиной сыворотками.

Рядом исследователей установлено, что как у людей, так и у животных, больных ботулизмом, токсин может циркулировать в крови. Поэтому во всех случаях целесообразно испытать ещё при жизни токсичность крови больных животных на мышах. Для исследования можно применять цитратную кровь или сыворотку мышам в количестве 0,5 - 1 мл подкожно.

Изложенный биологический метод определения токсина ботулинуса в кормовых средствах и в организме животных является основным, наиболее надёжным и безусловно обязательным для окончательной диагностики ботулизма.

Выделение культур b. botulinus. а) Из кормовых средств. Из от центрифугированного осадка настоя делают засев в колбочки (в 100 мл) со средой Тароцци (печёночный бульон) или в мозговую среду Гиблера под маслом. Перед засевом среду кипятят для регенерации в течение 15 - 20 минут и быстро охлаждают. Засев делают из каждого образца в две колбы. Одну из колб нагревают тотчас же после засева при 80°С в течение 20 минут; вторую не прогревают. Обе колбы помещают в термостат на 4 суток. Отсутствие роста следует контролировать не менее чем в течение 14 дней.

Через 4 - 7 дней роста из засеянной прогретой колбы (а в случае отсутствия в ней роста или подозрительных на ботулинус форм - ракеток, из непрогретой колбы) часть культуры центрифугируют или пропускают через тальковый фильтр. Фильтрат испытывают на мышах в дозах 0,5 - 1 мл или на морских свинках по описанной выше методике. При падеже животных опыт повторяют со специфической и нормальной сыворотками.

При наличии в культуре споровых (в форме ракеток) подозрительных -на ботулинус микробов, её прогревают 20 минут при 80°С и высевают на чашки Петри по способу Фортнера или Цейсслера или же в глубокий сахарный агар (с 1% глюкозы). Подозрительные колонии переносят на жидкую среду. Такие пересевы производят до полной уверенности в чистоте культуры.

Когда культура из исходного материала оказывается токсичной, но не содержит споровых форм, высев на твёрдую среду делают без прогревания в несколько пробирок с глубоким агаром или чашек (4 - 5) переносом материала из одной пробирки (чашки) в другую, чтобы получить изолированные колонии.

Полученную культуру испытывают на чистоту высевами в аэробных условиях (на простом мясопептонном бульоне и сахарном косом агаре), на биохимическую активность, токсичность - на белых мышах (5 - 7-суточная культура в дозе 0,5 мл), а также на специфичность токсина с соответствующими антиботулиновыми сыворотками.

Следует заметить, что нетоксигенные штаммы ботулинуса встречаются не так редко. Такие штаммы могут быть идентифицированы лишь агглютинирующими сыворотками.

б) Выделение чистых культур из организма павших животных имеет для диагностики условное значение.

Чаще всего ботулинус обнаруживают культурально в содержимом тонких кишок, селезёнке, крови, головном мозге, печени. Засевы делают из вытяжки органов или кусочками из них.

Серологические методы диагностики ботулизма - реакции агглютинации, преципитации, связывания комплемента - не разработаны ещё настолько, чтобы ими можно было надёжно пользоваться в практике.

Реакция агглютинации имеет значение лишь для идентификации чистых культур и установления типов ботулинуса.

Следует учесть, что каждый тип ботулинуса включает несколько серологических групп. Так, были найдены три группы для типа A и четыре - для типа B.

Пересылка материала на исследование. Материал направляется. для исследования в лабораторию в том виде, в котором он послужил источником отравления. В первую очередь берут порции кормов, изменённые по запаху и виду, но возможности, из разных мест. Образцы корма посылают в герметически закрытой посуде.

Лечение. Специфическим терапевтическим средством является антиботулиновая сыворотка. Типы ботулинуса, вызывающие в СССР отравления животных, ещё не установлены. Пока можно применять медицинские сыворотки типа A и B. Сывороточное лечение может дать эффект только при раннем применении, притом в больших дозах, 500 - 800 мл для крупных животных. Метод введения - внутривенный или внутримышечный. Для поддержания сердечной деятельности необходимы сердечные средства. Всегда следует пытаться удалить токсин из кишечника посредством быстродействующих слабительных и клизм.

Рекомендуется лечение ботулизма у лошадей введением ареколина под кожу в дозах 0,03 - 0,06, с одновременным опорожнением прямой кишки тёплыми клизмами. После инъекции ареколина лошади впрыскивается внутривенно физиологический раствор два - три раза в день по 1,5 - 2 л, а ещё лучше - через носоглоточный зонд 12 - 15 л воды. Таким методом лечения в начале болезни удаётся получать хороший эффект.

Не хуже действуют в начальный период внутривенные введения свежеприготовленного раствора новарсенола (1,5 г новарсенола в 15 - 20 мл дестиллированной воды).

Профилактика. Необходимо обеспечить правильную заготовку и хранение кормов, обращая особое внимание на следующее:

1) все кормовые средства, особенно идущие на силосование, должны быть тщательно осмотрены, с тем чтобы установить в них отсутствие трупов грызунов: кротов, крыс, мышей;

2) не допускать загрязнения кормов куриным и птичьим помётом;

3) не давать животным заплесневевших и загнивших кормов (сена, кукурузы, овса, ячменя, отрубей, полежавшей запаренной мякины, сечки);

4) самое серьёзное внимание следует уделять чистоте кормушек (очищать от частиц земли и остатков корма);

5) корм, заготовляемый для силосования, должен быть свободен от частиц земли;

6) скашивать силосную массу следует с таким расчётом, чтобы она была засилосована свежей в тот же день;

7) к скармливанию можно допускать только доброкачественный по запаху, цвету и консистенции силос.

Биологическая профилактика ботулизма. Необходимость предохранительной вакцинации против ботулизма может выявиться и в условиях мирного времени. В Южной Африке за последние годы введены предохранительные прививки крупного рогатого скота анатоксином против ботулизма. Производство анатоксина ботулинуса давно уже освоено медицинскими институтами. Этот препарат служит надёжным профилактическим средством, дающим достаточно продолжительный иммунитет. К тому же препарат можно долго хранить (до 2 лет).

При вспыщках ботулизма рекомендуется применение с профилактической целью антиботулиновой сыворотки; дозировка - 20 - 30 мл, с учётом, что сыворотки, изготовляемые в СССР, бивалентны (против типа А и В).