Лабораторная практика. Метод получения активной преципитирующей сибиреязвенной сыворотки и испытание ее в широкой практике

Профессор С. Г. КОЛЕСОВ

Госконтролер В. Н. ГРАЧЕВ

О методе получения преципитирующей сибиреязвенной сыворотки o было сообщено Асколи и Валенти в 1910 г.

В 1911 г. этот метод был разработан в России С. А. Алексеевым. В дальнейшем в части усовершенствования метода получения преципитирующей сибиреязвенной сыворотки много было сделано С. К. Беззубцем, а также Д. А. Радкевичем, Г. А. Кудрявцевым, Н. Н. Левитовым и другими.

В начальных опытах для гипериммунизации применяли первую вакцину Ланге и первую вакцину Ценковского. Однако в дальнейшем в практике изготовления преципитирующей сибиреязвенной сыворотки в качестве антигена применяли только первую вакцину Ценковского.

Получаемая при этом сыворотка обладала выраженной неспецифичностью. При исследовании кожсырья она давала до 10-15-25% неспецифических показаний, что сильно затрудняло проведение исследования кожсырья и других патологических материалов на сибирскую язву.

В 1932 г. болгарский исследователь К. Иванов сообщил о получении специфичной преципитирующей сибиреязвенной сыворотки путем гипер- иммунизации продуцентов вирулентной культурой сибирской язвы, убитой формалином.

Н. М. Никифорова и М. И. Ананьев в 1940 г. разработали новый метод получения преципитирующей сыворотки, заключающийся в том, что для гипериммунизации лошадей была применена вирулентная культура сибирской язвы, убитая формалином, в результате чего получена активная и специфичная преципитирующая сибиреязвенная сыворотка. Данный метод применяли в течение 12 лет, и он позволил устранить серьезную помеху - неспецифические реакции при исследовании кожсырья. Однако, как показала практика, этот метод получения сыворотки обладал и рядом существенных недостатков. К числу их относятся: а) длительные сроки гипериммунизации лошадей (в среднем 120 дней); б) повышенная общая и температурная реактивность лошадей на вводимую формолкультуру и случаи отхода лошадей в процессе гипериммунизации; в) от части лошадей нельзя получить активную преципитирующую сыворотку; д) ряд серий получаемой сыворотки обладал пониженной активностью, что вызвало необходимость установить срок ее годности 1 год.

В 1951 г. Ф. Е. Смирнов сообщил о получении преципитирующей сибиреязвенной сыворотки от 4 лошадей двумя различными методами гипериммунизации бескапсульными штаммами вакцины СТИ и ГИЭВ. В. В. Глотов в своей диссертации (1954) сообщает.о получении активной преципитирующей сибиреязвенной сыворотки от 2 лошадей при гипериммунизации одной из них второй вакциной Ценковского, другой - вакциной СТИ.

С целью разработки более совершенного метода получения преципитирующей сибиреязвенной сыворотки нами проведены специальные опыты на значительном поголовье лошадей.

Мы считали, что для более успешного получения активной и специфичной преципитирующей сибиреязвенной сыворотки необходимо применять Б качестве антигена живую слабовирулентную, но иммуногенную культуру сибирской язвы. В основу этого положены наши теоретические и практические данные, накопленные при проведении опытов по получению противосибиреязвенной сыворотки, проверке матриксов сибиреязвенных вакцин на иммуногенные свойства и изучении изменчивости микробов сибирской язвы.

Применение первой вакцины Ценковского в качестве антигена при получении преципитирующей сыворотки было неправильным потому, что эта вакцина не обладала иммуногенными свойствами при проверке на животных и антигенными свойствами в реакции преципитации с сывороткой, полученной с другими, более полноценными антигенами. Поэтому в качестве антигена при гипериммунизации лошадей для получения активной и специфичной преципитирующей сыворотки нами были взяты штаммы № 916-I, III-15, 94 и матрикс второй вакцины Ценковского, обладающие слабой вирулентностью и выраженными иммуногенными свойствами.

Разработанные нами схемы и методы гипериммунизации сначала кроликов, а затем лошадей для получения преципитирующей сыворотки были испытаны на Тобольской биофабрике в 1951 г.

После получения активной и специфичной сыворотки от кроликов работа была продолжена на лошадях. Под опыт взяли 21 лошадь.

В результате опытов от всех лошадей получена активная и специфичная преципитирующая сибиреязвенная сыворотка через 45-55 дней после гипериммунизации.

Таким образом, указанный способ получения преципитирующей сибиреязвенной сыворотки путем гипериммунизации лошадей живой культурой сибирской язвы имеет преимущество перед существующим в том, что он позволяет получать активную и специфичную сыворотку в значительно более короткий период времени и от всех лошадей.

Сыворотка опытных лошадей обладала высокой активностью, давая кольцепреципитацию со стандартным сибиреязвенным антигеном в течение 15-30 секунд и с экстрактами из сибиреязвенных кож от 35-45 секунд до 1 минуты 30 секунд. Вновь полученная сыворотка обладала и специфическими свойствами, не образуя кольцепреципитации с антигенами из микробов антракоида и псевдоантракса.

Комиссионной проверкой вновь полученной преципитирующей сибиреязвенной сыворотки в Тобольской межрайонной ветбаклаборатории на сборном пресносухом кожсырье, параллельно со свежеизготовленной контрольной преципитирующей сибиреязвенной сывороткой серии № 34, была установлена ее высокая активность и специфичность.

Реакция лошадей на интравенозное введение антигена, состоящего из штаммов живой слабовирулентной культуры сибирской язвы, является значительно менее выраженной. Данное положение подтверждается тем, что сильных анафилактических явлений при интравенозном введении антигена не было. Если и была у незначительного количества лошадей реакция, то она выражалась лишь в появлении очень небольшой возбудимости, длившейся 2-5 минут.

Температурная реакция отмечена у небольшого количества лошадей и была кратковременной (3-4-6 часов). Лошади, подвергающиеся гипериммунизации формолкультурой, имеют более выраженную анафилактическую и температурную реакцию на вводимый антиген, продолжающуюся 12-14-18 и даже 20 часов.

В 1952 г. В. Н. Грачевым и специалистами преципитирующего цеха биофабрики проведена дополнительная работа по проверке нового метода гипериммунизации лошадей для получения преципитирующей сибиреязвенной сыворотки.

В цехе преципитирующей сыворотки имелось 8 лошадей, которые, несмотря на длительную (от 6 до 8 месяцев) гипериммунизацию формол-культурой, не давали активной преципитирующей сибиреязвенной сыворотки. Эти лошади были переведены на новый метод гипериммунизации живой слабовирулентной культурой сибирской язвы. После 6, 8 и 11 инъ- екций антигена все 8 лошадей дали активную преципитирующую сыворотку и были переданы в цех для эксплуатации.

Из 37 лошадей, которых гипериммунизировали в течение 2 месяцев культурой сибирской язвы, убитой формалином, дали активную сыворотку лишь б лошадей. Остальные лошади, ввиду острой потребности в преципитирующей сибиреязвенной сыворотке, были переведены на новый метод гипериммунизации живой культурой сибирской язвы. 18 лошадей дали активную преципитирующую сыворотку после 4-5 инъекций, 9 лошадей - после 6-7 и 4 лошади - после 13 и 17 инъекций антигена и были переданы в цех для эксплуатации.

18 лошадей цеха противосибиреязвенной сыворотки Алма-Атинского биокомбината, которых эксплуатировали в течение 2-3 лет, были переданы в цех преципитирующей сыворотки 9 октября 1951 г., причем после 74 дней гипериммунизации формолкультурой они не дали активной сыворотки и были переведены на новый метод гипериммунизации. После 6-8-12-17 инъекций антигена от 16 лошадей была получена активная преципитирующая сыворотка. Остальные две лошади вскоре также были введены в эксплуатацию.

12 лошадей цеха противосибиреязвенной сыворотки были переданы под преципитирующую сыворотку путем гипериммунизации по новому методу. После введения 8-12-15 инъекций антигена от всех лошадей была получена активная и специфичная сыворотка.

В 1952 и 1953 гг. на Тобольской биофабрике гипериммунизации подвергли 99 вновь завезенных лошадей. Данные первых опытов 1951 г. полностью подтвердились: в течение 50-75 дней от всех лошадей была получена активная и специфичная преципитирующая сибиреязвенная сыворотка.

Всего на Тобольской биофабрике гипериммунизировали новым методом 189 лошадей, причем отхода продуцентов в процессе подготовки не было, и все они дали активную сыворотку.

В 1953 г. гипериммунизации указанным методом подвергли 43 лошади на Орловской биофабрике. От всех лошадей также получена активная и специфичная преципитирующая сибиреязвенная сыворотка в установленные ранее нами сроки.

Таким образом, всего на Тобольской и Орловской биофабриках новым методом в течение 3 лет гипериммунизированы 232 лошади.

Из отзывов работников биофабрик видно, что новый метод гипериммунизации лошадей оказался более совершенным. Он обеспечивает получение активной и специфичной сыворотки от всех лошадей, вдвое сокращает количество времени по сравнению с существующим методом, что позволяет значительно уменьшить расходы на содержание и гипериммунизацию лошадей и получать сверх плана большое количество преципитирующей сыворотки. Интенсивное и большое накопление пре-ципитинов в крови продуцентов при новом методе дает возможность производить взятие крови у 60% лошадей без очередного введения антигена в течение 3-5 месяцев. Это также позволяет значительно увеличивать количество получаемой от продуцентов сыворотки.

Практика двухгодичной гипериммунизации и эксплуатации продуцентов новым методом показывает, что срок службы продуцентов при этом способе будет значительно увеличен.

В процессе получения преципитирующей сибиреязвенной сыворотки указанным методом ее подвергали изучению на активные и специфические свойства, а также на длительность срока годности.

В неоднократных комиссионных опытах на Тобольской биофабрике и Всесоюзной научно-исследовательской лаборатории санитарии и дезинфекции с участием ветврачей биофабрики и заведующей отделом лаборатории Л. Е. Наймушиной было установлено, что преципитирующая сыворотка, получаемая новым способом, обладает высокой активностью и специфичностью в реакции преципитации.

Проверка 12 серий преципитирующей сыворотки, изготовленной по новому методу, со сроком давности больше двух лет после изготовления показала возможность применять ее в реакции преципитации при исследовании кожсырья и других материалов животного происхождения на сибирскую язву в течение 2 лет.

За период с 1951 по декабрь 1953 г. биофабриками изготовлены и выпущены 66 серий преципитирующей сибиреязвенной сыворотки, полученной новым методом, в количестве 12 086 л, что составило 36 258 000 доз.

По данным, полученным Тобольской биофабрикой и Государственным научно-контрольным институтом от 22 лабораторий Союза, было исследовано на сибирскую язву 574 210 проб кожсырья различных видов сельскохозяйственных животных. При этом неспецифичных реакций в работе с новой преципитирующей сывороткой не отмечено. С помощью этой сыворотки выявлено сибиреязвенное кожсырье, и правильность результатов реакции преципитации подтверждена методами бактериологического и биологического исследований.

По данным Всесоюзной научно-исследовательской лаборатории ветеринарной санитарии и дезинфекции (Л. Е. Наймушина) при помощи преципитирующей сибиреязвенной сыворотки, полученной новым методом, исследована 151 000 проб кожсырья пресносухой и мокросоленой консервировок. В практике лаборатории было использовано 10 серий, 7 из них изготовлены Тобольской биофабрикой и 3 - Орловской. Заведующая отделом лаборатории научный сотрудник Л. Е. Наймушина сообщает, чго новая преципитирующая сыворотка показала хорошую активность и специфичность при выявлении сибиреязвенного кожсырья.

Из письма начальника ветотдела Алтайского крайсельхозуправления Ф. И. Тарейкина видно, что преципитирующая сыворотка была испытана в широкой практике лабораторий, причем с экстрактами из 30 заведомо сибиреязвенных кож сыворотка дала кольцепреципитацию через 1-2 минуты. При помощи указанной сыворотки исследованы десятки тысяч проб кожсырья, и неспецифичных реакций не отмечено.

Заведующий Бийской лабораторией т. Подлинных сообщает, что преципитирующая сыворотка, полученная новым методом, была испытана при проверке 122 557 проб кожсырья, причем установлено, что сыворотка обладает высокой активностью и специфичностью.

Мы привели данные по проверке преципитирующей сибиреязвенной сыворотки только 3 лабораторий, в сообщениях остальных 19 лабораторий и организаций, из которых мы получили сведения, также указывается о высоком качестве преципитирующей сыворотки.

Разработанный нами метод получения преципитирующей сибиреязвенной сыворотки внедрен в производство биофабрик, а сыворотка - в широкую практику работ лабораторий Союза ССР.