Иммунизация овец против бруцеллеза штаммом brucella suis № 61

Кандидат ветеринарных наук Д. С. БОРЗЕНКОВ

Главное управление сельскохозяйственной пропаганды и науки MCX СССР

Изучение методов активной профилактики при бруцеллезе сельскохозяйственных животных, начатое более пятидесяти лет назад, продолжается до настоящего времени.

Лучшие результаты, по мнению многих авторов (С. Н. Вышелесский, М. К. Юсковец, П. Ф. Здродовский, Е. С. Орлов и др.), дают вакцины из живых слабовирулентных бруцелл.

Накопленные в производственных условиях многочисленные данные по использованию вакцины из живых слабовирулентных штаммов бруцелл также свидетельствуют об их эффективности.

В качестве вакцинного препарата мы применяли культуру штамма Brucella suis Ms 61, которая, по данным бруцеллезной лаборатории ВИЭВ и Московской ветеринарной академии, является слабовирулентной и обладает выраженными иммунизирующими свойствами.

Проверкой культуральных и биохимических свойств штамма Brucella suis №61 установлено, что на скошенной поверхности агара через 48 часов эта культура давала нежный, влажный, сплошной рост или бесцветные, несколько выпуклые, блестящие, правильно контурированные колонии. Смыв двухсуточной агаровой культуры физиологическим раствором поваренной соли представлял гомогенную стойкую суспензию. Пробы с трипафлавином и на термоагглютинацию дали отрицательные результаты.

При росте на печеночном агаре культура в течение 4-5 суток бурно выделяла сероводород. На полужидком агаре с тионином (1:25 и 1 : 50 тыс.) через 24-48 часов появлялся рост, оцениваемый нами в 3-4 креста. На среде с фуксином (1 : 50 тыс.) рост не наблюдался.

Вирулентные свойства штамма Brucella suis № 61 изучали на овцах. Для этого брали овец, имевших суягность от двух недель до трех месяцев, заражали подкожно или внутрикожно дозами 500 млн. и 2 млрд. бактерийных тел. Все овцы окотились нормально. Бактериологическим исследованием вагинальной слизи и молока у этих овец после ягнения ни в одном случае культуры бруцелл не получено.

Длительность и напряженность иммунитета в зависимости от дозы и метода введения вакцины также изучали на овцах.

Овец вакцинировали группами под кожу и внутрикожно дозами 2 млрд., 500 млн. и 500 тыс. бактерийных тел и через 4,5 месяца подвергали заражению вирулентной культурой Brucella melitensis № 200 в дозе 15 тыс. бактерийных тел. У всех овец, независимо от дозы и способа введения вакцины, установлен полный иммунитет.

Часть овец через 4,5 месяца ревакцинировали теми же дозами и способами, а через следующие 4,5 месяца подвергали заражению той же вирулентной культурой бруцелл, но повышенной дозой - 50 тыс. бактерийных тел. Овцы, вакцинированные внутрикожно, проявляли устойчивость к заражению (полный и частичный иммунитет) в 100%, а в группе овец, вакцинированных под кожу, оказались иммунными 50% - у контрольных овец установлена генерализованная инфекция.

Иммунологическую перестройку организма в зависимости от дозы и способа введения вакцины из слабозирулентной культуры бруцелл изучали путем периодического исследования овец РА, РСК, ОФР и цитологическим методом.

Агглютинация у овец появилась в высоком титре (1 : 400 - 1 : 3200) на 7-й день.

Титр РА был выше у привитых большей дозой (2 млрд. бактерийных тел). Разница в титре отмечена также у овец, привитых внутрикожно и под кожу. У последних в первые дни титр РА был ниже, чем у привитых внутрикожно. К 124-му дню титр РА снизился, особенно у овец, вакцинированных меньшими дозами (500 тыс. и 500 млн. бактерийных тел).

После ревакцинации титр РА уже на 4-й день у всех овец повысился с 1 : 25-1 : 100 до 1 : 50-1 : 200 и у большинства из них оставался на том же уровне до 124-го дня. К 15-му дню после заражения вирулентной культурой бруцелл (на 142-й день после ревакцинации) титр РА у всех овец еще повысился до 1 : 100-1 : 400.

Комплемент-связывающие вещества появились у овец тоже на 7-й день и сохранялись в основном до 3-х месяцев.

У ревакцинированных овец РСК имела те же закономерности. На 4-й день после ревакцинации РСК стала положительной и у 50% овец сохранялась до 124 дней. После заражения вирулентной культурой бруцелл все овцы снова дали положительную РСК.

Опсоно-фагоцитарной реакцией исследовали часть овец. Опсоно-фагоцитарный индекс у невакцинированных овец равнялся 0-5. Показания ОФР параллельно с РА и РСК изучали после вакцинации. На 6-й день у всех овец, независимо от дозы и метода введения вакцины, опсоно-фагоцитарный индекс повысился до 25-34 и оставался на том же уровне в течение всего периода наблюдения за овцами.

Таким образом, показания ОФР более постоянны и длительнее сохраняются, чем РА и РСК. Резкое повышение опеоно-фагоцитарного индекса на 6-й день после вакцинации у овец, привитых различными дозами и методами штаммом Brucella suis № 61, свидетельствует о быстрой иммунологической перестройке организма животных.

Цитологический метод применен для исследования воспалительного экссудата из места введения вакцины.

При наблюдении за привитыми животными отмечено, что образование местной воспалительной реакции зависит от дозы и метода введения вакцины. На внутрикожную инъекцию вакцины реагировало большее количество овец, чем при подкожном введении ее в той же дозе. Интенсивность местной реакции также была более выражена у привитых внутрикожно. Результаты изучения воспалительной реакции на месте введения вакцины с помощью цитологического метода показывают, что вакцина из штамма Brucella suis № 61 вызывает активную реакцию ретикуло-эндотелиальной системы организма животных. Интенсивность последней зависит как от дозы, так и от способа ее введения.

Применение больших доз вакцины (2 млрд. бактерийных тел) не вызывает угнетающего действия защитных сил организма животных, как это отмечено другими авторами (М. И. Чернышева) при введении такой же дозы вирулентной культуры бруцелл. В наших опытах при больших дозах вакцины развивалась более активная реакция и несколько быстрее, чем на меньших дозах. При экспериментальном заражении вирулентной культурой бруцелл мы также обнаруживали более выраженный иммунитет у жизотных, привитых большими дозами вакцины.

Таким образом, наши исследования показывают, что активность макрофагальной реакции на месте введения прививочного препарата, устанавливаемая цитологическим методом, характеризует иммунизирующие свойства прививочного препарата и эффективность применяемой дозы.

Результаты изучения иммуногенных свойств штамма Brucella suis jfo 61 и опыты по выяснению значения дозы и метода введения вакцины, проведенные на овцах, дают основание для следующего заключения.

1. Культуральные и биохимические свойства штамма Brucella suis № 61 соответствуют типу suis.

2. Штамм Brucella suis № 61 является слабовирулентным. Это свойство штамма убедительно характеризует опыты по заражению суягных овец, которым вводили 500 млн. и 2 млрд. бактерийных тел этого штамма, и при этом не наблюдали абортов, локализации культуры в вымени, а также в послеродовых выделениях.

3. Штамм Brucella suis № 61 обладает высокими иммуногенными свойствами.

Все привитые овцы становятся устойчивыми к экспериментальному заражению вирулентной культурой Brucella melitensis № 200 в течение 4,5 месяца (предельный срок наблюдения).

Получение напряженного и длительного иммунитета у овец при вакцинации их культурой из штамма Brucella suis № 61 представляет большой практический интерес, так как до настоящего времени для иммунизации этого вида животных в практике не имеется противобруцеллезной вакцины.

4. Внутрикожный метод вакцинации является более эффективным, чем подкожный, особенно при введении малых доз. Такая разница, повидимому, обусловливается тем, что кожа более богата окончаниями нервнорецепторного аппарата, чем подкожная клетчатка, вследствие чего происходит более полное специфическое раздражение центральной нервной системы и быстрое образование иммунитета.

5. После введения вакцины из штамма Brucella suis № 61 у овец на 7-й день образуются агглютинины в высоком титре и комплементсвязывающие вещества.

При внутрикожном введении вакцины титр РА у овец выше, чем при подкожной инъекции ее в тех же дозах. Угасание РА быстрее происходит у животных, вакцинированных меньшими дозами.

При ревакцинации нарастание антител отмечено уже на 4-й день, что свидетельствует о повышенной иммунологической реактивности организма вакцинированных животных.

Серологические реакции не характеризуют состояние иммунитета у вакцинированных животных, так как разницы в закономерности появления и угасания агглютининов и комплементсвязывающих веществ у проявивших устойчивость к заражению вирулентной культурой по сравнению с неиммунными не отмечается.

6. Опсоно-фагоцитарная реакция у вакцинированных овец становится положительной несколько раньше, чем РА и PGK, и результаты ее более постоянны. Положительная ОФР свидетельствует об иммунном состоянии организма у привитых животных. Показания ОФР могут служить критерием при изучении реактивности и иммунологической перестройки организма животного, а также в значительной мере характеризовать иммунизирующие свойства препарата.

7. Цитологическим исследованием воспалительного экссудата с места введения вакцины из штамма Brucella suis № 61 устанавливается активная реакция ретикуло-эндотелиальной системы животного, которая выражается в появлении большого количества макрофагов и активном фагоцитозе. Более выраженная реакция РЭО получается при внутри кожном введении вакцины в отличие от подкожного.

При инъекции больших доз вакцины из штамма Brucella suis № 61 не отмечается угнетения защитных сил организма, как это имеет место при введении вирулентной культуры бруцелл. Наоборот, при больших дозах вакцины из этого штамма (2 млрд. бактерийных тел) активная реакция РЭС развивается быстрее, чем при введении малых доз (500 тыс. бактерийных тел).

Активная реакция РЭС на месте введения вакцины соответствует иммунному состоянию организма животного. Поэтому по интенсивности макрофагальной реакции, устанавливаемой цитологическим исследованием в местном воспалительном экссудате, могут быть определены иммунизирующие свойства и оптимальная доза прививочного препарата.

8. Показания ОФР и цитологического исследования подтверждают данные экспериментального испытания иммунитета у вакцинированных животных о высоких иммуногенных свойствах штамма № 61.

Полученные нами данные о безвредности и высоких иммунизирую щих свойствах штамма Brucella suis № 61 указывают на целесообраз ность широкого применения его в производственных условиях для иммунизации овец против бруцеллеза, а также испытания на других видах животных.